हमने सेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करने के लिए पिछले सप्ताह कई विचार साझा किए थे, और हम आपके संदर्भ के लिए इस विषय को आज यहां समाप्त करेंगे।
का चयन बफ़र एकाग्रता
सेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन में उपयोग की जाने वाली बफर सांद्रता आम तौर पर पेपर वैद्युतकणसंचलन में प्रयुक्त बफर सांद्रता से कम होती है।आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला पीएच 8.6Bआर्बिटल बफर को आमतौर पर 0.05 mol/L से 0.09 mol/L की सीमा के भीतर चुना जाता है।एकाग्रता का चयन करते समय, प्रारंभिक निर्धारण किया जाता है।उदाहरण के लिए, यदि वैद्युतकणसंचलन कक्ष में इलेक्ट्रोड के बीच झिल्ली पट्टी की लंबाई 8-10 सेमी है, तो झिल्ली लंबाई के प्रति सेंटीमीटर 25V का वोल्टेज आवश्यक है, और वर्तमान तीव्रता झिल्ली चौड़ाई के प्रति सेंटीमीटर 0.4-0.5 एमए होनी चाहिए।यदि वैद्युतकणसंचलन के दौरान ये मान प्राप्त नहीं होते हैं या इससे अधिक हो जाते हैं, तो बफर एकाग्रता को बढ़ाया या पतला किया जाना चाहिए।
अत्यधिक कम बफर सांद्रता के परिणामस्वरूप बैंड की तीव्र गति होगी और बैंड की चौड़ाई में वृद्धि होगी।दूसरी ओर, अत्यधिक उच्च बफर सांद्रता बैंड माइग्रेशन को धीमा कर देगी, जिससे कुछ पृथक्करण बैंडों को अलग करना मुश्किल हो जाएगा।
यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि सेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन में, वर्तमान का एक महत्वपूर्ण हिस्सा नमूने के माध्यम से संचालित होता है, जो काफी मात्रा में गर्मी उत्पन्न करता है।कभी-कभी, चुनी गई बफर सांद्रता को उपयुक्त माना जा सकता है।हालाँकि, बढ़े हुए पर्यावरणीय तापमान की स्थिति में या उच्च वोल्टेज का उपयोग करते समय, गर्मी के कारण पानी का वाष्पीकरण तेज हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप अत्यधिक उच्च बफर सांद्रता हो सकती है और यहां तक कि झिल्ली भी सूख सकती है।
नमूना मात्रा
सेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन में, नमूना मात्रा की मात्रा विभिन्न कारकों द्वारा निर्धारित की जाती है, जिसमें वैद्युतकणसंचलन की स्थिति, नमूने के गुण, धुंधला होने के तरीके और पता लगाने की तकनीक शामिल हैं।एक सामान्य सिद्धांत के रूप में, पता लगाने की विधि जितनी अधिक संवेदनशील होगी, नमूना मात्रा उतनी ही छोटी हो सकती है, जो पृथक्करण के लिए फायदेमंद है।यदि नमूना मात्रा अत्यधिक है, तो इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण पैटर्न स्पष्ट नहीं हो सकता है, और धुंधला होने में भी समय लग सकता है।हालाँकि, जब रेफरेंस कलरिमेट्रिक डिटेक्शन विधियों का उपयोग करके अलग-अलग दाग वाले बैंड का मात्रात्मक विश्लेषण किया जाता है, तो नमूना मात्रा बहुत छोटी नहीं होनी चाहिए, क्योंकि इसके परिणामस्वरूप कुछ घटकों के लिए कम अवशोषण मान हो सकते हैं, जिससे उनकी सामग्री की गणना में उच्च त्रुटियां हो सकती हैं।ऐसे मामलों में, नमूना मात्रा उचित रूप से बढ़ाई जानी चाहिए।
आमतौर पर, नमूना अनुप्रयोग लाइन के प्रत्येक सेंटीमीटर पर जोड़ा गया नमूना मात्रा 0.1 से 5 μL तक होता है, जो 5 से 1000 μg की नमूना मात्रा के बराबर होता है।उदाहरण के लिए, नियमित सीरम प्रोटीन वैद्युतकणसंचलन विश्लेषण में, एप्लिकेशन लाइन के प्रत्येक सेंटीमीटर पर जोड़ा गया नमूना मात्रा आम तौर पर 1 μL से अधिक नहीं होती है, जो 60 से 80 μg प्रोटीन के बराबर होती है।हालाँकि, समान वैद्युतकणसंचलन विधि का उपयोग करके लिपोप्रोटीन या ग्लाइकोप्रोटीन का विश्लेषण करते समय, नमूना मात्रा को तदनुसार बढ़ाने की आवश्यकता होती है।
निष्कर्ष में, प्रारंभिक प्रयोगों की एक श्रृंखला के माध्यम से विशिष्ट स्थितियों के आधार पर सबसे उपयुक्त नमूना मात्रा का चयन किया जाना चाहिए।
धुंधलापन समाधान का चयन
सेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन में अलग-अलग बैंड आमतौर पर पता लगाने से पहले दाग दिए जाते हैं।विभिन्न नमूना घटकों को अलग-अलग धुंधला तरीकों की आवश्यकता होती है, और सेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन के लिए उपयुक्त धुंधला तरीके पूरी तरह से फिल्टर पेपर पर लागू नहीं हो सकते हैं।
धुंधलापन समाधान चुनने के तीन प्रमुख सिद्धांत हैंसेल्युलोज एसीटेट झिल्ली.पहले तो,अल्कोहल-घुलनशील रंगों की तुलना में पानी में घुलनशील रंगों को प्राथमिकता दी जानी चाहिए ताकि अल्कोहल-घुलनशील रंगों के कारण होने वाली झिल्ली सिकुड़न और विरूपण से बचा जा सके।दाग लगने के बाद, झिल्ली को पानी से धोना और दाग लगने की अवधि को कम करना महत्वपूर्ण है।अन्यथा, झिल्ली मुड़ या सिकुड़ सकती है, जो बाद में पता लगाने को प्रभावित करेगी।
दूसरे, नमूने के लिए मजबूत धुंधलापन संबंध वाले रंगों का चयन करना बेहतर है।सीरम प्रोटीन के सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन में, अमीनो ब्लैक 10बी का उपयोग आमतौर पर विभिन्न सीरम प्रोटीन घटकों और इसकी स्थिरता के लिए मजबूत धुंधला संबंध के कारण किया जाता है।
तीसरा, विश्वसनीय गुणवत्ता वाले रंगों का चयन किया जाना चाहिए।कुछ रंगों में, समान नाम होने के बावजूद, उनमें अशुद्धियाँ हो सकती हैं जिसके परिणामस्वरूप रंगाई के बाद विशेष रूप से गहरे रंग की पृष्ठभूमि बन जाती है।यह मूल रूप से अच्छी तरह से अलग किए गए बैंड को भी धुंधला कर सकता है, जिससे उन्हें अलग करना मुश्किल हो जाता है।
अंत में, धुंधलापन समाधान एकाग्रता का चुनाव महत्वपूर्ण है।सैद्धांतिक रूप से, ऐसा लग सकता है कि उच्च धुंधला समाधान एकाग्रता से नमूना घटकों का अधिक गहन धुंधलापन और बेहतर धुंधला परिणाम प्राप्त होंगे।बहरहाल, मामला यह नहीं।नमूना घटकों और डाई के बीच बंधन संबंध की एक निश्चित सीमा होती है, जो धुंधला समाधान एकाग्रता में वृद्धि के साथ नहीं बढ़ती है।इसके विपरीत, अत्यधिक उच्च धुंधला घोल सांद्रण न केवल डाई को बर्बाद करता है बल्कि एक स्पष्ट पृष्ठभूमि प्राप्त करना भी मुश्किल बना देता है।इसके अलावा, जब रंग की तीव्रता एक निश्चित अधिकतम मूल्य तक पहुंच जाती है, तो डाई का अवशोषण वक्र एक रैखिक संबंध का पालन नहीं करता है, विशेष रूप से मात्रात्मक माप में। सेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन में, धुंधला समाधान एकाग्रता आम तौर पर कागज वैद्युतकणसंचलन में उपयोग की तुलना में कम होती है।
बीजिंग लियूई बायोटेक्नोलॉजी के बारे में जानने के लिए विवरण's सेल्युलोज एसीटेट झिल्लीवैद्युतकणसंचलन टैंक और इसके वैद्युतकणसंचलन अनुप्रयोग, कृपया यहां देखें:
एलसेलूलोज़ एसीटेट मेम्ब्रेन द्वारा सीरम प्रोटीन को अलग करने का प्रयोग
एलसेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन
एलसेलूलोज़ एसीटेट झिल्ली वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करते समय कई बातों को ध्यान में रखा जाना चाहिए (1)
यदि आपके पास हमारे उत्पादों के लिए कोई खरीदारी योजना है, तो कृपया हमसे संपर्क करने में संकोच न करें।आप हमें ईमेल पर संदेश भेज सकते हैं[ईमेल सुरक्षित]या[ईमेल सुरक्षित], या कृपया हमें +86 15810650221 पर कॉल करें या व्हाट्सएप +86 15810650221, या वीचैट: 15810650221 जोड़ें।
संदर्भ:वैद्युतकणसंचलन (दूसरा संस्करण) श्री ली द्वारा
पोस्ट समय: जून-06-2023