सेलूलोज़ एसीटेट मेम्ब्रेन इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा सीरम प्रोटीन को अलग करने का प्रयोग

सिद्धांत

सेलूलोज़ एसीटेट फिल्म वैद्युतकणसंचलन एक वैद्युतकणसंचलन विधि है जो एक समर्थन के रूप में सेलूलोज़ एसीटेट फिल्म का उपयोग करती है।वह घटना जिसमें आवेशित कण विद्युत क्षेत्र की क्रिया के तहत विपरीत इलेक्ट्रोड की ओर बढ़ते हैं, वैद्युतकणसंचलन कहलाती है।चूँकि प्रत्येक प्रोटीन में एक विशिष्ट आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु होता है, यदि एक प्रोटीन को उसके आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु से कम पीएच वाले घोल में रखा जाता है, तो प्रोटीन सकारात्मक रूप से चार्ज हो जाएगा और नकारात्मक इलेक्ट्रोड की ओर बढ़ जाएगा।इसके विपरीत, यह सकारात्मक ध्रुव की ओर बढ़ता है।चूँकि विद्युत क्षेत्र में घूमने वाले प्रोटीन अणुओं की गति उनके आवेश, अणुओं के आकार और आकार से संबंधित होती है, इसलिए विभिन्न प्रोटीनों को वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया जा सकता है।सीरम में विभिन्न प्रकार के प्रोटीन होते हैं, जिनमें से सभी में pH7.5 या उससे कम पर आइसोइलेक्ट्रिक पॉइंट होते हैं।जब इलेक्ट्रोफोरेसिस चलाने के लिए सीरम को पीएच 8.6 बफर में रखा जाता है, तो सभी सीरम प्रोटीन नकारात्मक रूप से चार्ज होते हैं और विद्युत क्षेत्र में सकारात्मक पक्ष की ओर बढ़ेंगे।चूंकि विभिन्न सीरम प्रोटीनों में एक ही पीएच पर अलग-अलग चार्ज होते हैं, आणविक कण आकार में भिन्न होते हैं, और इस प्रकार प्रवासन की गति अलग होती है, और उन्हें इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा अलग किया जाता है।सीरम प्रोटीन के आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु और आणविक भार नीचे दी गई तालिका में दिखाए गए हैं:

यह प्रयोग सहायक मीडिया के रूप में सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली (एबीबीआर. सीएएम) के साथ रक्त सीरम में विभिन्न प्रोटीनों को अलग करने के लिए है।सीएएम एक प्रकार का फोमयुक्त लूज़ हैeअच्छी वर्दी वाली फिल्म, और मोटाई 0.1 मिमी-1.5 मिमी है, जिसमें एक निश्चित जल अवशोषण होता है।

सीएएम वैद्युतकणसंचलन के लिए सामग्री, उपकरण और अभिकर्मक

नमूने:स्वस्थ मानव रक्त सीरम

यंत्र:बिजली आपूर्ति DYY-6C, वैद्युतकणसंचलन टैंक DYCP-38C, बेहतर नमूना लोडिंग WD-9404

अभिकर्मक

1) सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली 7X9 सेमी

2) पीएच 8.6 बार्बिटोल बफर सॉल्यूशन (आयनिक शक्ति 0.05-0.09, यह 0.06 टीआईडी ​​समय है।): 1,84 ग्राम डायथाइल बार्बिट्यूरिक एसिड लें, और फिर 1.03 ग्राम डायथाइल सोडियम पेंटोबार्बिटल लें, घुलने के लिए गर्म करने के लिए कुछ आसुत जल डालें, और बनाएं 1000 मिलीलीटर तक;

3) दाग: पोंसेउ एस 0.2 ग्राम, ट्राइक्लोरोएसेटिक 3 जी, 100 मिलीलीटर आसुत जल जोड़ें;

4) टीबीएस/टी या पीबीएस/टी: 45 मिलीलीटर 95% इथेनॉल, 5 मिलीलीटर ग्लेशियल एसिटिक एसिड, 50 मिलीलीटर आसुत जल जोड़ें;

5) सफाई समाधान: 70 मिलीलीटर निर्जल इथेनॉल, 30 मिलीलीटर ग्लेशियल एसिटिक एसिड।

प्रयोग मेथोd

1) झिल्ली तैयार करें: झिल्ली को बार्बिटोल बफर घोल में 30 मिनट-8 घंटे के लिए डुबोएं, और इसे बाहर निकालें, अतिरिक्त घोल को अवशोषक कागज से हटा दें।

2) नमूने लोड करना: झिल्ली के खुरदुरे हिस्से और चिकने हिस्से को अलग करें, और खुरदुरे हिस्से पर शीर्ष सिरे तक 1.5 सेमी की दूरी पर एक रेखा चिह्नित करें।रफ साइड पर बेहतर नमूना लोडिंग टूल द्वारा नमूने लोड करें।नोट: नमूनों को झिल्ली के खुरदुरे हिस्से पर लोड किया जाना चाहिए।सीरम के नमूने पूरी तरह से झिल्ली में प्रवेश करने के बाद, झिल्ली को पलट दें, खुरदुरे हिस्से (नमूनों के साथ) को टैंक के नीचे की ओर रखें, और नमूनों के साथ अंत को नकारात्मक इलेक्ट्रोड में रखें।

3) वैद्युतकणसंचलन: बिजली की आपूर्ति चालू करें, 0.4～0.6 मीटर ए/सेमी झिल्ली, चलने का समय 30-45 मिनट है।वैद्युतकणसंचलन चलाने के बाद, बिजली बंद कर दें।

4) दाग और साफ करें: झिल्ली को टैंक से बाहर निकालें और डुबो देंit 5 मिनट के लिए डाई घोल में डालें, और फिर इसे सफाई घोल में 3-4 बार बार-बार साफ करें जब तक कि पृष्ठभूमि का रंग साफ न हो जाए।सीरम प्रोटीन को बैंड पर दिखाया जाना चाहिए, और आम तौर पर पांच जोन होते हैं, जो चिह्नित रेखा के शीर्ष छोर पर होते हैं, एल्बुमिन, α1-ग्लौलिन, α2-ग्लौलिन, β-ग्लौलिन, γ-ग्लौलिन।

5) संरक्षण: सूखी इलेक्ट्रोफोरेसिस डालेंबैंड10-15 मिनट तक सफाई वाले घोल में रखें और फिर इसे निकालकर साफ कांच पर चिपका दें, सूखने के बाद यह एक पारदर्शी फिल्म बन जाएगीबैंड.

प्रयोगपरिणाम

सीरम नमूनों का पृथक्करण प्रभाव अच्छा है, और कोई बैंड टेलिंग घटना नहीं है।परिणामों की पुनरावृत्ति परीक्षण प्रक्रियाओं और प्रयोगकर्ता के तरीकों के कारण भिन्न होती है, और पुनरावृत्ति अधिक होती है।

निष्कर्ष

तीव्र नैदानिक ​​वैद्युतकणसंचलन पहचान प्रणाली (वैद्युतकणसंचलन टैंकडीवाईसीपी-38सी,बिजली की आपूर्तिDYY-6C और बेहतर नमूना लोडिंग WD-9404) हमारे द्वारा उत्पादितकंपनी बीजिंग लियूयी बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेडप्रायोगिक आवश्यकताओं को पूरा करता है,औरपरिणाम प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, सरल और तेज़, के लिए उपयुक्त हैंशिक्षणअनुसंधान.

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