डीएनए जेल वैद्युतकणसंचलन एक सामान्य आणविक जीव विज्ञान तकनीक है जिसका उपयोग डीएनए टुकड़ों को उनके आकार के आधार पर अलग करने और उनका विश्लेषण करने के लिए किया जाता है।इस प्रक्रिया में लाल शैवाल में पाए जाने वाले कार्बोहाइड्रेट, अगारोज से बने जेल पर विभिन्न आकार के डीएनए टुकड़े लोड करना शामिल है।
अगारोज जेल तैयार करना और कास्टिंग करना
- इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर की उचित मात्रा में एग्रोस को घोलें।जेल की सांद्रता द्रव्यमान-से-आयतन अनुपात द्वारा निर्धारित की जाती है, जैसे कि 100 में 1 ग्राम एग्रोज़ml 1% जेल के लिए बफर का।
- एग्रोज़ का पूर्ण विघटन सुनिश्चित करने के लिए मिश्रण को माइक्रोवेव में गर्म करें, कंटेनर को घुमाएँ।
- 0.5 की अंतिम सांद्रता तक जेल घोल में एथिडियम ब्रोमाइड मिलाएंएमजी/ ml.एथिडियम ब्रोमाइड आसन्न डीएनए बेस जोड़े के बीच अंतर्संबंधित होता है और यूवी प्रकाश के तहत नारंगी प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है।ध्यान दें कि एथिडियम ब्रोमाइड एक कैंसरजन है, इसलिए इसे संभालने के लिए दस्ताने पहनने जैसे उचित सुरक्षा उपायों की आवश्यकता होती है।
- उच्च तापमान के कारण जेल ट्रे को विकृत होने से बचाने के लिए जेल घोल को पानी के स्नान में ठंडा करें।
- नमूना कुएँ बनाने के लिए जेल घोल में एक कंघी रखें।आपके द्वारा लोड किए जाने वाले डीएनए नमूने की मात्रा के लिए उपयुक्त कंघी का चयन करें।इसमें एगरोज़ जेल घोल डालेंजेल ट्रेऔर इसे कमरे के तापमान पर जमने दें।
- एक बार जब जेल जम जाए तो कंघी हटा दें।यदि आप तुरंत जेल का उपयोग नहीं करेंगे, तो इसे प्लास्टिक रैप में लपेटें और आवश्यकता पड़ने तक 4℃ पर संग्रहित करें।
जेल तैयार करना और चलाना
वैद्युतकणसंचलन शुरू करने से पहले, लोडिंग बफर के साथ डीएनए नमूना मिलाएं।लोडिंग बफर आमतौर पर छह गुना अधिक केंद्रित होता है और नमूने को कुओं के नीचे तक डूबने और इलेक्ट्रोफोरोसिस के दौरान आंदोलन को ट्रैक करने में मदद करता है।
बिजली आपूर्ति को निर्दिष्ट वोल्टेज पर सेट करें।
जेल की सतह को कवर करने के लिए जेल टैंक में पर्याप्त इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर जोड़ें।सुनिश्चित करनासही इलेक्ट्रोड कनेक्शन.
डीएनए नमूना और आणविक भार मार्करों को जेल कुओं में लोड करें।
वैद्युतकणसंचलन शुरू करने के लिए बिजली की आपूर्ति चालू करें।
अलग हुए डीएनए अंशों का अवलोकन करना
वैद्युतकणसंचलन के बाद, बिजली की आपूर्ति बंद करें और जेल हटा दें।
जेल को रोशन करने के लिए यूवी प्रकाश स्रोत का उपयोग करें;डीएनए के टुकड़े नारंगी फ्लोरोसेंट बैंड के रूप में दिखाई देंगे।
अलग हुए डीएनए अंशों का विश्लेषण करने के लिए जेल छवि का दस्तावेजीकरण करें।
प्रयोग के बाद, प्रयोगशाला दिशानिर्देशों का पालन करते हुए जेल और इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर का उचित निपटान सुनिश्चित करें।इस खतरनाक पदार्थ के संपर्क से बचाने के लिए एथिडियम ब्रोमाइड युक्त जैल और बफ़र्स को संभालते समय हमेशा दस्ताने पहनें।
डीएनए जेल वैद्युतकणसंचलन का व्यापक रूप से आणविक जीव विज्ञान और आनुवंशिकी अनुसंधान में डीएनए अणु के आकार का अनुमान लगाने, डीएनए टुकड़ों को अलग करने, जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने और डीएनए फ़िंगरप्रिंटिंग सहित अन्य अनुप्रयोगों के लिए उपयोग किया जाता है।यह एक सरल और प्रभावी प्रायोगिक तकनीक है जो डीएनए नमूनों की संरचना और विशेषताओं को समझने में मदद करती है।
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यहाँ हम करेंगेअनुशंसा करनाएक प्रकार का क्षैतिज वैद्युतकणसंचलन टैंक (कक्ष/सेल) मॉडलडीवाईसीपी-31डीएन जेल बनाने और चलाने के लिए.
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पोस्ट करने का समय: अगस्त-08-2023