जेल वैद्युतकणसंचलन का अनुकूलन: नमूना मात्रा, वोल्टेज और समय के लिए सर्वोत्तम अभ्यास

परिचय

जेल वैद्युतकणसंचलन आणविक जीव विज्ञान में एक मौलिक तकनीक है, जिसका व्यापक रूप से प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड और अन्य मैक्रोमोलेक्यूल्स को अलग करने के लिए उपयोग किया जाता है। सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए नमूना मात्रा, वोल्टेज और वैद्युतकणसंचलन समय का उचित नियंत्रण महत्वपूर्ण है।हमारे लैब सहयोगी ऑफर करते हैंएसडीएस-पेज जेल वैद्युतकणसंचलन के दौरान इन मापदंडों के प्रबंधन के लिए सर्वोत्तम अभ्यास।

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नमूना मात्रा: निरंतरता सुनिश्चित करना

एसडीएस-पेज वैद्युतकणसंचलन करते समय, नमूना मात्रा एक महत्वपूर्ण कारक है जो आपके परिणामों के रिज़ॉल्यूशन को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित कर सकता है। आमतौर पर प्रति कुएं में कुल प्रोटीन का 10 μL लोड करने की अनुशंसा की जाती है। स्थिरता सुनिश्चित करने और आसन्न कुओं के बीच नमूना प्रसार को रोकने के लिए, किसी भी खाली कुओं में 1x लोडिंग बफर की समान मात्रा लोड करना महत्वपूर्ण है। यह सावधानी नमूनों को पड़ोसी गलियों में फैलने से रोकने में मदद करती है, जो कि कुएँ को खाली छोड़ देने पर हो सकता है।

अपने नमूने लोड करने से पहले, हमेशा एक कुएं में आणविक भार मार्कर जोड़कर शुरुआत करें। यह वैद्युतकणसंचलन के बाद प्रोटीन के आकार की आसान पहचान की अनुमति देता है।

वोल्टेज नियंत्रण: गति और रिज़ॉल्यूशन को संतुलित करना

वैद्युतकणसंचलन के दौरान लगाया गया वोल्टेज सीधे उस गति दोनों को प्रभावित करता है जिस पर नमूने जेल के माध्यम से स्थानांतरित होते हैं और पृथक्करण का संकल्प। एसडीएस-पेज के लिए, लगभग 80V के कम वोल्टेज से शुरुआत करने की सलाह दी जाती है। यह प्रारंभिक कम वोल्टेज नमूनों को धीरे-धीरे और समान रूप से स्थानांतरित करने की अनुमति देता है, जैसे ही वे अलग जेल में प्रवेश करते हैं, उन्हें एक तेज बैंड में केंद्रित करते हैं।

एक बार जब नमूने पूरी तरह से अलग करने वाले जेल में प्रवेश कर जाते हैं, तो वोल्टेज को 120V तक बढ़ाया जा सकता है। यह उच्च वोल्टेज प्रवासन को तेज करता है, जिससे यह सुनिश्चित होता है कि प्रोटीन उनके आणविक भार के अनुसार कुशलतापूर्वक अलग हो जाते हैं। ब्रोमोफेनॉल ब्लू डाई फ्रंट की प्रगति की निगरानी करना आवश्यक है, जो वैद्युतकणसंचलन के पूरा होने का संकेत देता है। 10-12% की सांद्रता वाले जैल के लिए, 80-90 मिनट आमतौर पर पर्याप्त होते हैं; हालाँकि, 15% जैल के लिए, आपको रन टाइम को थोड़ा बढ़ाने की आवश्यकता हो सकती है।

समय प्रबंधन: यह जानना कि कब रुकना है

जेल वैद्युतकणसंचलन में समय एक और महत्वपूर्ण कारक है। जेल को बहुत लंबे समय तक या बहुत कम समय तक चलाने से इष्टतम पृथक्करण नहीं हो सकता है। ब्रोमोफेनॉल ब्लू डाई का स्थानांतरण एक उपयोगी संकेतक है: जब यह जेल के निचले भाग तक पहुँच जाता है, तो आमतौर पर इसे रोकना बंद करने का समय होता है। मानक जैल के लिए, जैसे कि 10-12%, लगभग 80-90 मिनट की वैद्युतकणसंचलन अवधि आमतौर पर पर्याप्त होती है। उच्च प्रतिशत जैल के लिए, जैसे 15%, प्रोटीन का पूर्ण पृथक्करण सुनिश्चित करने के लिए रन टाइम बढ़ाया जाना चाहिए।

बफ़र प्रबंधन: बफ़र्स का पुन: उपयोग और तैयारी

आपकी प्रयोगशाला की विशिष्ट स्थितियों के आधार पर, इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर का 1-2 बार पुन: उपयोग किया जा सकता है। हालांकि, सर्वोत्तम परिणामों के लिए, ताजा 10x बफर तैयार करने और उपयोग से ठीक पहले इसे पतला करने की सिफारिश की जाती है। यह सुनिश्चित करता है कि बफर अपनी प्रभावशीलता बनाए रखता है, जिससे अधिक विश्वसनीय इलेक्ट्रोफोरेसिस परिणाम प्राप्त होते हैं।

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नमूना मात्रा, वोल्टेज और वैद्युतकणसंचलन समय को सावधानीपूर्वक नियंत्रित करके, आप अपने जेल वैद्युतकणसंचलन परिणामों की सटीकता और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता में काफी सुधार कर सकते हैं। अपने प्रयोगशाला कार्य में इन सर्वोत्तम प्रथाओं को लागू करने से आपको स्पष्ट और अधिक विशिष्ट बैंड प्राप्त करने में मदद मिलेगी, जिससे डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए बेहतर डेटा प्राप्त होगा।

यदि आपके पास जेल वैद्युतकणसंचलन प्रयोग को अनुकूलित करने के लिए और भी अच्छे तरीके हैं, तो हमारे साथ चर्चा करने के लिए आपका स्वागत है!

बीजिंग लियूई बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (लियूई बायोटेक्नोलॉजी) ने हमारी अपनी पेशेवर तकनीकी टीम और अनुसंधान एवं विकास केंद्र के साथ 50 से अधिक वर्षों से इलेक्ट्रोफोरेसिस उपकरणों के निर्माण में विशेषज्ञता हासिल की है। हमारे पास डिज़ाइन से लेकर निरीक्षण और गोदाम तक विश्वसनीय और पूर्ण उत्पादन लाइन है, साथ ही विपणन सहायता भी है। हमारे मुख्य उत्पाद इलेक्ट्रोफोरेसिस सेल (टैंक/चेंबर), इलेक्ट्रोफोरेसिस पावर सप्लाई, ब्लू एलईडी ट्रांसिल्यूमिनेटर, यूवी ट्रांसिल्यूमिनेटर, जेल इमेज एंड एनालिसिस सिस्टम आदि हैं। हम प्रयोगशाला के लिए पीसीआर उपकरण, भंवर मिक्सर और सेंट्रीफ्यूज जैसे प्रयोगशाला उपकरणों की भी आपूर्ति करते हैं।

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