जेल वैद्युतकणसंचलन डीएनए के विश्लेषण के लिए आणविक जीव विज्ञान में उपयोग की जाने वाली प्रमुख विधियों में से एक है। इस विधि में एक जेल के माध्यम से डीएनए के टुकड़ों का स्थानांतरण शामिल है, जहां उन्हें आकार या आकृति के आधार पर अलग किया जाता है। हालाँकि, क्या आपने कभी अपने वैद्युतकणसंचलन प्रयोगों के दौरान किसी त्रुटि का सामना किया है, जैसे एगरोज़ जेल पर लगे बैंड, या जेल पर कोई बैंड नहीं? इन त्रुटियों का कारण क्या हो सकता है?
हमारे तकनीशियनों ने आपके संदर्भ के लिए यहां कुछ समस्या निवारण का सारांश दिया है।
1. अगारोज जेल पर स्मीर्ड बैंड
●डीएनए ख़राब हो गया था. न्यूक्लियस संदूषण से बचें.
● वैद्युतकणसंचलन बफ़र ताज़ा नहीं है। वैद्युतकणसंचलन बफर के बार-बार उपयोग के बाद, आयनिक शक्ति कम हो जाती है, और इसका पीएच मान बढ़ जाता है, इसलिए बफर क्षमता कमजोर हो जाती है, जो वैद्युतकणसंचलन प्रभाव को प्रभावित करती है। इलेक्ट्रोफोरेसिस बफ़र को बार-बार बदलने की अनुशंसा की जाती है।
● अनुचित वैद्युतकणसंचलन स्थितियों का उपयोग किया गया। वोल्टेज को 20 वी/सेमी से अधिक न होने दें और वैद्युतकणसंचलन के दौरान तापमान 30 डिग्री सेल्सियस से कम बनाए रखें। विशाल डीएनए स्ट्रैंड वैद्युतकणसंचलन के लिए, तापमान <15° C होना चाहिए। जाँच करें कि वैद्युतकणसंचलन बफर में पर्याप्त बफर क्षमता है।
● जेल पर बहुत अधिक डीएनए लोड किया गया था। डीएनए की मात्रा कम करें.
● डीएनए में बहुत अधिक नमक। उन्नत अवस्था में अतिरिक्त लवण हटाने के लिए इथेनॉल अवक्षेपण का उपयोग करें।
● डीएनए प्रोटीन से दूषित था। उन्नत अवस्था में प्रोटीन को हटाने के लिए फिनोल अर्क का उपयोग करें।
● डीएनए विकृत हो गया था। वैद्युतकणसंचलन से पहले गरम न करें. 20 एमएम NaCl के साथ बफर में डीएनए को पतला करें।
2. विसंगतियाँ डीएनए बैंड माइग्रेशन
● λHind III टुकड़े की COS साइट का नवीनीकरण। वैद्युतकणसंचलन से पहले डीएनए को 65 डिग्री सेल्सियस के नीचे 5 मिनट तक गर्म करें, और फिर इसे बर्फ इकाई पर 5 मिनट तक ठंडा करें।
● अनुचित वैद्युतकणसंचलन स्थितियों का उपयोग किया गया। वोल्टेज को 20 वी/सेमी से अधिक न होने दें और वैद्युतकणसंचलन के दौरान तापमान 30 डिग्री सेल्सियस से कम बनाए रखें। जांचें कि इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर में पर्याप्त बफर क्षमता है।
● डीएनए विकृत हो गया था। वैद्युतकणसंचलन से पहले गरम न करें. 20 एमएम NaCl के साथ बफर में डीएनए को पतला करें।
3. एगरोज़ जेल पर डीएनए बैंड फीका या कोई नहीं
● जेल पर डीएनए की अपर्याप्त मात्रा या सांद्रता भरी हुई थी। डीएनए की मात्रा बढ़ाएँ. पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन एगरोज़ वैद्युतकणसंचलन की तुलना में थोड़ा अधिक संवेदनशील है, और नमूना लोडिंग को उचित रूप से कम किया जा सकता है।
● डीएनए ख़राब हो गया था. न्यूक्लियस संदूषण से बचें.
● डीएनए को जेल से इलेक्ट्रोफोरेस किया गया। कम समय के लिए जेल को इलेक्ट्रोफोरस करें, कम वोल्टेज का उपयोग करें, या उच्च प्रतिशत जेल का उपयोग करें।
● एथिडियम ब्रोमाइड-सना हुआ डीएनए के दृश्य के लिए अनुचित डब्ल्यू प्रकाश स्रोत का उपयोग किया गया था। अधिक संवेदनशीलता के लिए शॉर्टवेवलेंथ (254 एनएम) डब्ल्यू प्रकाश का उपयोग करें।
4. डीएनए बैंड गायब
●छोटे आकार के डीएनए को जेल से इलेक्ट्रोफोरेस किया गया। कम समय के लिए जेल को इलेक्ट्रोफोरस करें, कम वोल्टेज का उपयोग करें, या उच्च प्रतिशत जेल का उपयोग करें।
● समान आणविक के डीएनए बैंड को अलग करना मुश्किल है। वैद्युतकणसंचलन समय बढ़ाएँ, और एकाग्रता की जाँच करेंयह सुनिश्चित करने के लिए कि उपयोग किए जाने वाले जेल का प्रतिशत सही है।
● डीएनए विकृत हो गया था। वैद्युतकणसंचलन से पहले गरम न करें. 20 एमएम NaCl के साथ बफर में डीएनए को पतला करें।
● डीएनए स्ट्रैंड विशाल हैं, और पारंपरिक जेल वैद्युतकणसंचलन उपयुक्त नहीं है। पल्स जेल वैद्युतकणसंचलन पर विश्लेषण करें।एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन के साथ आपको और क्या समस्याएं हुई हैं? हम भविष्य में गाइडों के लिए और अधिक शोध करेंगे।
बीजिंग लियूई बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (लियूई बायोटेक) एक विशेष कंपनी है जो चीन में इलेक्ट्रोफोरेसिस से संबंधित उत्पादों पर ध्यान केंद्रित करती है। इसकी कहानी 1970 में शुरू होती है जब चीन ने सुधार और खुलेपन के समय में प्रवेश नहीं किया था। वर्षों के विकास के माध्यम से, लियूई बिटोटेक का अपना ब्रांड है, जिसे इलेक्ट्रोफोरेसिस उत्पादों के लिए घरेलू बाजार में लियूई ब्रांड के रूप में जाना जाता है।
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इस बीच, हम अपनी इलेक्ट्रोफोरेसिस बिजली आपूर्ति की अनुशंसा करते हैंDYY-6C,DYY-6DऔरDYY-10Cहमारे वैद्युतकणसंचलन कोशिकाओं (टैंक/कक्ष) डीवाईसीपी-31 और 32 श्रृंखला के लिए।
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पोस्ट समय: मई-09-2022