1. वर्गीकरण
जेल वैद्युतकणसंचलन को ऊर्ध्वाधर प्रकार (स्तंभ जैल और स्लैब जैल सहित) और क्षैतिज प्रकार (मुख्य रूप से स्लैब जैल) में विभाजित किया गया है (चित्र 6-18)। आम तौर पर, ऊर्ध्वाधर पृथक्करण क्षैतिज से थोड़ा बेहतर होता है, लेकिन क्षैतिज जेल की तैयारी के कम से कम चार फायदे होते हैं: पूरे जेल के नीचे समर्थन होता है, जिससे कम-सांद्रता वाले एगरोज़ के उपयोग की अनुमति मिलती है; विभिन्न विशिष्टताओं की एगरोज़ जेल प्लेटें तैयार करना संभव है; जेल तैयार करना और नमूना लोड करना अधिक सुविधाजनक है; वैद्युतकणसंचलन कक्ष का निर्माण आसान और लागत प्रभावी है। चूँकि क्षैतिज वैद्युतकणसंचलन एगरोज़ जेल प्लेट को वैद्युतकणसंचलन बफर की सतह से लगभग 1 मिमी नीचे पूरी तरह से डुबो कर किया जाता है, इसलिए इसे जलमग्न वैद्युतकणसंचलन भी कहा जाता है।
एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए वैद्युतकणसंचलन टैंक DYCP-31DN
2.बफर सिस्टम
न्यूक्लिक एसिड पृथक्करण में, अधिकांश प्रणालियाँ निरंतर प्रणाली अपनाती हैं। आम तौर पर उपयोग किए जाने वाले इलेक्ट्रोफोरेसिस बफ़र्स में TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L बोरिक एसिड, 0.0024mol/L EDTA) बफर और THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L शामिल हैं) सोडियम एसीटेट, 0.0018mol/L EDTA) बफर। इन बफ़र्स को आम तौर पर 10x स्टॉक समाधान के रूप में तैयार किया जाता है और उपयोग में आने पर आवश्यक एकाग्रता तक पतला किया जाता है। एगरोज़ जेल में रैखिक और गोलाकार डीएनए की प्रवासन दर उपयोग किए गए बफर के साथ भिन्न होती है। टीएचई बफर में, रैखिक डीएनए की प्रवासन दर परिपत्र डीएनए की तुलना में अधिक है, जबकि टीबीई बफर में, विपरीत सच है।
3.अगारोज जेल की तैयारी
(1) हॉरिजॉन्टल अगारोज जेल तैयार करना
(ए) 1x इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर का उपयोग करके अगारोज जेल की आवश्यक सांद्रता तैयार करें।
(बी) एगरोज़ को उबलते पानी के स्नान में, चुंबकीय स्टिरर पर, या माइक्रोवेव में पूरी तरह से घुलने तक गर्म करें। एगरोज़ घोल को 55°C तक ठंडा करें और 0.5 μg/ml की अंतिम सांद्रता तक एथिडियम ब्रोमाइड (EB) डाई मिलाएं।
(सी) कांच या ऐक्रेलिक प्लेटों के किनारों को थोड़ी मात्रा में एगरोज़ जेल से सील करें, एक कंघी लगाएं, और कंघी के दांतों को प्लेट से लगभग 0.5 ~ 1.0 मिमी ऊपर रखें।
(डी) पिघले हुए अगारोज जेल घोल को ग्लास या ऐक्रेलिक प्लेट मोल्ड (मोटाई डीएनए नमूने की मात्रा पर निर्भर करती है) में लगातार डालें, जिससे हवा के बुलबुले आने से बचें। इसे कमरे के तापमान पर प्राकृतिक रूप से जमने दें।
(ई) पूरी तरह जमने के बाद कंघी को सावधानीपूर्वक हटा दें। जेल टैंक में उचित मात्रा में इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर जोड़ें, यह सुनिश्चित करते हुए कि जेल प्लेट इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर की सतह से लगभग 1 मिमी नीचे डूबी हुई है।
(2) वर्टिकल अगारोज जेल तैयार करना
(ए) इथेनॉल से धोकर कांच की प्लेटों से ग्रीस या अवशेष हटा दें।
(बी) आगे और पीछे के बांधों के बीच स्पेसर प्लेटें रखें, स्पेसर प्लेटों के किनारों को आगे और पीछे के बांधों के साथ संरेखित करें, और उन्हें क्लैंप से सुरक्षित करें।
(सी) जेल कास्टिंग कक्ष के नीचे 1 सेमी ऊंचा एगरोज़ प्लग बनाने के लिए स्पेसर प्लेटों के किनारों के बीच 1x बफर में 2% एगरोज़ जोड़ें।
(डी) पिघले हुए अगारोज जेल को वांछित सांद्रता में, 1x बफर में तैयार करके, शीर्ष से 1 सेमी नीचे तक जेल कक्ष में डालें।
(ई) कंघी के दांतों के नीचे हवा के बुलबुले फंसने से बचने के लिए कंघी डालें। कभी-कभी, एगरोज़ जेल कूलिंग के दौरान कंघी के दांतों पर झुर्रियाँ दिखाई दे सकती हैं; ऐसे मामलों में, इसे ठोस बनाने के लिए बस ऊपर से कुछ पिघला हुआ अगारोज डालें।
(च) कंघी हटा दें। लोडिंग स्लॉट में बफर रिसाव को रोकने के लिए, एगरोज़ जेल प्लेट और इलेक्ट्रोफोरेसिस चैंबर के बीच के कनेक्शन को 2% एगरोज़ से सील करें और आवश्यक मात्रा में बफर जोड़ें।
(छ) जेल चैम्बर में 1x वैद्युतकणसंचलन बफर जोड़ें।
(ज) बफर के नीचे एगरोज़ जेल पर डीएनए नमूने सावधानीपूर्वक लोड करें।
एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन के बारे में बुनियादी ज्ञान के बारे में अधिक जानकारी, हम अगले सप्ताह साझा करेंगे। आशा है कि ये जानकारी आपके प्रयोग में सहायक होगी।
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पोस्ट करने का समय: दिसम्बर-07-2023